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【目的】原核表达与纯化猴痘病毒B20R重组蛋白，通过小鼠免疫实验研究其免疫原性，为猴痘病毒检测及疫苗研发提供新思路。【方法】参照GenBank公布的猴痘病毒基因组序列，按照大肠杆菌密码子偏好性进行全基因合成，将合成的B20R基因分别克隆至pET-28a和pET-32a载体，构建pET-28a-B20R和pET-32a-B20R重组质粒。将两种重组质粒分别转化E. coli BL21感受态细胞，添加IPTG诱导目的蛋白表达，使用SDS-PAGE和Western blot检测B20R重组蛋白表达情况。通过控制变量法探索B20R重组蛋白的最佳表达条件并进行大量表达，使用Ni柱进行亲和层析纯化。将纯化的B20R重组蛋白多次免疫小鼠，定期采集小鼠血清，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗体效价。【结果】成功构建了pET-28a-B20R和pET-32a-B20R重组表达载体，两者均可在E. coli BL21菌株中以包涵体形式诱导表达B20R重组蛋白，且表达产物能被His-tag抗体识别，其中pET-32a-B20R介导的B20R重组蛋白表达量更高。经条件优化后发现，B20R重组蛋白在37 ℃条件下，使用浓度为0.6 mM IPTG诱导表达12 h后可获得最大表达量。B20R重组蛋白免疫小鼠42天后，ELISA检测血清抗体效价可达1：409600。【结论】利用E. coli BL21菌株成功表达猴痘病毒B20R重组蛋白，小鼠免疫实验显示该蛋白具有良好的免疫原性，能够激发小鼠产生较强的体液免疫。本研究结果对进一步探究B20R蛋白的生物学功能、猴痘病毒的检测与疫苗开发奠定了一定的理论基础。
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