【目的】从云南烟草黑胫病高发区烟草根际土壤分离对烟草黑胫病菌具有高效拮抗作用的菌株，明确菌株分类地位，并进行体外拮抗机理初探，为烟草黑胫病的防治提供生防资源和参考依据。【方法】采用平板对峙法从烟草根际土壤中分离对烟草黑胫病菌具有拮抗作用的菌株，通过生理生化特性和16S rDNA序列分析对具有较强拮抗活性的菌株进行鉴定，并测定生防细菌在体外对烟草疫霉的生物防治活性及作用方式。【结果】经平板对峙法筛选得到6株对烟草疫霉具有拮抗作用的菌株，其中CD-1表现出最强的拮抗活性，其抑菌带宽度达10.12 mm，根据生理生化特性 和16S rDNA序列分析，将该菌株鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)；菌株CD-1具有广谱抗真菌特性，胞内和胞外均存在抗真菌物质，其中用二氯甲烷作为细菌发酵液萃取剂所提取的抗真菌物质抑制效果最好，在pH6～8、温度在40～80 ℃时表现出相对稳定的抑制活性；菌株CD-1在NB培养基中培养，其产生的抗真菌物质含量高于本研究中所测试的其他培养基；菌株CD-1分泌的抗真菌物质能破坏烟草疫霉孢子质膜，抑制孢子萌发，当浓度为0.4 mg/mL时，孢子失膜率达53.62 %，孢子的发芽被完全抑制，同时检测到有明显的离子和核酸渗漏。【结论】菌株CD-1对烟草疫霉具有较强的拮抗能力，其通过破坏烟草疫霉的细胞膜，致使细胞渗漏和细胞内容物的释放，进而抑制孢子萌发达到抑菌目的，该菌株具备开发生防菌剂的潜力价值。