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广西人工养殖牛蛙源嗜水气单胞菌的分离鉴定及致病力分析
作者: 李鹏飞  肖双燕  韦冬冬  余庆  刘明珠  甘文林  何金钊  韩书煜  
单位: 广西科学院  广西科学院  广西科学院  广西科学院  广西科学院  
关键词: 牛蛙  嗜水气单胞菌  致病性  耐药性  组织病理特征  
分类号:
摘要:

摘要:【目的】确定引起广西人工养殖牛蛙(Rana catesbeiana)发病死亡的病原菌,了解其致病性情况、组织病理学特征、耐药性及耐药基因的携带情况及,为牛蛙临床疾病诊断及合理预防提供科学依据,同时为保障牛蛙的健康生态养殖提供理论依据。【方法】采用常规细菌分离纯化方法从患病牛蛙的病灶组织中分离优势菌株,通过观察分离菌株的形态特征、生理生化特征鉴定和16S rRNA基因序列分析等对病原菌进行鉴定,以纸片扩散法测定其耐药性,通过PCR扩增分析其耐药基因和毒力基因携带情况,通过人工回归感染试验确定病原菌的致病性,并通过组织病理学研究牛蛙感染后的组织特性。【结果】从患病牛蛙腿部分离得到1株优势菌株(编号NFAH-5),综合菌株NFAH-5的形态学、生理生化特性、溶血特性及分子鉴定结果,确定分离得到的菌株是嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。菌株NFAH-5对多西环素、多粘菌素B、庆大霉素等6种抗生素敏感,对头孢拉定、恩诺沙星和阿莫西林等12种抗生素已产生耐药性;经耐药基因PCR检测显示,该分离菌携带Ant(3″)-I、Intl1、parC等6种耐药基因,与耐药表型基本一致。毒力基因PCR检测显示,菌株NFAH-5携带Ser、aer、Lip、exu、LuxS、act和aha等7种毒力基因。人工回归感染试验结果表明,菌株NFAH-5感染牛蛙半数致死剂量(LD50)为1.55×106 CFU/mL,感染后发病牛蛙表现为四肢底侧充血发红,肝肿大呈红褐色或黄色,肠内空虚或有出血,肾充血发红,与自然发病牛蛙的症状相似。患病牛蛙的肝细胞发生变性;脾脏红、白髓质之间很难辨出,可见大量的血源性色素沉着物,肾小球萎缩,肾小管发生玻璃样变。【结论】嗜水气单胞菌是引起广西南宁人工养殖牛蛙发生红腿病的致病菌,可选用敏感药物多西环素进行防治。

基金项目:
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