【目的】克隆鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus,AngHV)的ORF115,进行生物信息学与转录时相分析,并进行原核表达,为解析ORF[基金项目:福建省公益类科研院所基本科研专项(2022R1027001);福建省农业科学院“5511”协同创新工程建设项目(XTCXGC2021013)。
作者简介:陈曦(1982-),https://orcid.org/0000-0003-2522-0352,男,学士,助理研究员,研究方向:水生病毒学。E-mail:kobeid@163.com。
*通信作者:葛均青(1977-),https://orcid.org/0000-0002-9563-9872,男,博士,副研究员,研究方向:水产保护学。E-mail:jqge@163.com。
]15的特性及功能奠定基础。【方法】根据GenBank中AngHV参考株(NC_013668)序列,设计特异性扩增 ORF115的引物,从分离的AngHV-FJ病毒株基因组中PCR扩增出特异性片段,克隆至pMD19-T载体,经酶切和测序验证,获得ORF115的基因序列。采用在线软件分析该序列生物信息学特征;采用RT-PCR对ORF115进行转录时相分析;将ORF115克隆至表达载体pET-32a,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导蛋白表达,对产物进行SDS-PAGE及western blotting分析。【结果】克隆了AngHV福建株(AngHV-FJ)ORF115,全长318bp;序列的生物信息学预测表明,OR115蛋白属酸性弱疏水蛋白,较稳定,存在跨膜结构,无信号肽,主要分布于细胞质中,有长片段抗原表位;转录时相分析表明,ORF115是病毒的晚期基因,可能在病毒感染的晚期阶段发挥作用。SDS-PAGE及western blotting分析显示,实现了ORF115在大肠杆菌中的高效表达,表达蛋白大小与预期一致,约为32 kDa。【结论】AngHV ORF115属酸性弱疏水蛋白,有长片段抗原表位, 是病毒的晚期基因,通过原核表达获得了OR115重组表达蛋白,为后期制备多克隆抗体,研发AngHV的亚单位疫苗提供研究基础。
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