【目的】分离筛选高效结瘤固氮的花生根瘤菌，为花生根瘤菌田间推广应用提供理论依据和候选菌种。【方法】采用植物捕获法从田间采集的土样中分离纯化根瘤菌，扩增其16S rDNA序列进行分子鉴定。经回接试验和匹配试验筛选优良菌株及最佳共生组合，并通过土培与田间试验探究优良菌株的接种效果。【结果】共分离纯化出15株花生根瘤菌，均属于Bradyrhizobium。回接试验筛选出2株共生固氮性状优良的花生根瘤菌GDHS-5和GDHS-14。匹配试验表明这2株菌具有广谱结瘤性，GDHS-5与粤油901的匹配效果最好，GDHS-14次之。土培条件下接种GDHS-5显著提高了粤油901的地上部分高度、根瘤数量和根瘤鲜重，而接种GDHS-14与CK之间不具有显著性差异。田间条件下接种GDHS-5分别使单株荚果数、产量和花生蔗糖含量显著增加了35.82%、9.92%、165.88%，接种GDHS-14与CK之间不具有显著性差异。【结论】花生根瘤菌GDHS-5和GDHS-14共生固氮表现优异，其中GDHS-5具有较大的田间应用潜力。