摘要：【目的】明确广西贺州烟区一种真菌性叶斑病害的病原菌种类，以期为进一步研究病害的发生规律和防治手段提供理论参考。【方法】采用组织分离法对从广西贺州烟区采集的烟草叶斑病害叶片组织进行病原菌的分离纯化，利用科赫式法则验证其致病性；并通过形态学结合多基因序列联合分析（ITS、 LSU、TUB2、RPB2）对病原菌进行种类鉴定，应用十字交叉法测定病原菌的生物学特性。【结果】经分离纯化获得7个菌株，通过科赫法则证明7个菌株均为烟草品种K326的叶斑病病原菌，菌株间的致病力无明显差异。联合ITS、LSU、TUB2和RPB2基因构建系统发育进化树，结果显示7个菌株均与菌株S. vannaccii LFN0148和YTH-12聚为一支，且支持率为100%。生物学特性测定结果表明，病原菌S.vannaccii菌丝生长的最适温度为25 ~ 28℃，最适碳源为可溶性淀粉，最适氮源为蛋白胨和牛肉浸粉，最适pH为6 ~ 9；适宜培养基为马铃薯葡萄糖培养基（PDA）、燕麦培养基（OA）和南瓜汁培养基（PA），在全光照条件下菌丝生长最快，致死温度为50℃水浴处理10 min。【结论】引起广西贺州烟区烟草叶斑病的病原菌为Stagonosporopsis vannaccii ，这是S. vannaccii引起烟草叶斑病在中国的首次报道，该病原菌喜好在弱酸性至弱碱性、光照充足且营养丰富的环境条件下生长，在烟草生产过程中可通过控制烟草种植密度、加强田间管理以及采取化学、生物防治等方法对由S. vannaccii引起的烟草叶斑病进行综合防控。