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【目的】制备交叉反应谱能针对多种血清型鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的通用性高的广谱单克隆抗体，为鉴定IBV的表位、研究N蛋白功能及建立IBV通用型检测方法打下基础。【方法】通过原核表达IBV广西优势血清型代表株GX-YL5的N蛋白，纯化后免疫BALB/c小鼠，免疫小鼠血清效价达104以上后取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，应用间接ELISA方法筛选获得一株杂交瘤细胞并命名为N2D5，后通过小鼠腹水诱生法制备单克隆抗体，对其效价、亚型、反应特异性、交叉反应谱进行测定，并将制备的单克隆抗体应用于免疫组化技术，对SPF鸡人工感染4株代表性IBV变异株GX-NN130048、GX-NN160421、GX-QZ171023和GX-QZ170728后不同时间的气管和肾脏组织的IBV进行检测。【结果】制备的单克隆抗体N2D5效价大于217，亚型为IgG2b；Western blot和IFA结果表明单克隆抗体N2D5只与IBV发生反应，与国内流行的多种基因型和广西流行的所有7种血清型IBV均发生反应；免疫组化结果显示，在4株IBV变异株感染后的气管和肾脏组织中均能检测到病毒信号，进一步证明其广谱性。【结论】通过杂交瘤技术获得广谱型IBV单克隆抗体N2D5，交叉反应涵盖国内流行的多种基因型和广西流行的所有7种血清型IBV，特异性好，与病毒的结合能力高，可用于免疫组化技术检测病毒的分布。
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