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斑马鱼血管新生相关因子PTPRB的原核表达及其多克隆抗体制备
作者: 冯鹏霏  肖蕊  罗洪林  
单位: 广西大学动物科学技术学院  
关键词: 斑马鱼  PTPRB  原核表达  多克隆抗体  
分类号:
摘要:

【目的】为体外表达斑马鱼(Danio rerio,DAR)PTPRB蛋白并制备抗该蛋白的多克隆抗体,本研究通过构建斑马鱼PTPRB原核表达载体pET-B2m-PTPRB,转化大肠埃希菌B21菌株,并用IPTG诱导得到融合蛋白HIS-PTPRB。【方法】采用无缝克隆技术将斑马鱼PTPRB基因片段构建到pET-B2m原核表达载体上,转化E.coli B21中,通过加入IPTG进行诱导表达,将表达的PTPRB蛋白经纯化后免疫大耳兔制备多克隆抗体,采用Western blot、ELISA实验检测多克隆抗体特异性和效价。【结果】结果显示,成功构建了pET-B2m-PTPRB重组原核表达质粒,诱导表达获得了35 kD的重组蛋白,主要以包涵体形式存在;纯化蛋白免疫大耳兔,多克隆抗体效价大于1∶4096000;Western blot检测结果显示,重组斑马鱼PTPRB蛋白获得具良好抗原特异性的抗PTPRB多克隆抗体。【结论】原核表达体系的建立及多克隆抗体的制备,为进一步研究PTPRB在斑马鱼先天性免疫中的功能奠定了基础。

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参考文献:
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