【目的】明确Na+、K+、pH及3种单糖对湖拟鲤精子活力的单独调控和综合调控，筛选出湖拟鲤精子的适宜激活配方，为其人工繁殖及种质资源保护提供技术参考。【方法】以快速运动时间（FT）和寿命时间（LT）为指标，采用单因素试验和正交试验研究不同渗透压条件下Na+、K+、pH及3种单糖（葡萄糖、果糖和半乳糖）对湖拟鲤精子活力的单独和综合调控作用，筛选湖拟鲤精子的适宜激活液配方。【结果】Na+溶液渗透压为282.36 kPa时湖拟鲤精子的FT和LT达最大值（40.00和285.33 s），K+溶液渗透压为211.77 kPa时湖拟鲤精子的FT和LT达最大值（36.00和130.33 s），葡萄糖溶液渗透压为352.95 kPa时湖拟鲤精子的FT和LT达最大值（43.67和355.33 s），果糖溶液渗透压为352.95 kPa时湖拟鲤精子的FT和LT达最大值（45.00和372.67 s），半乳糖溶液渗透压为235.30 kPa时湖拟鲤精子的FT和LT达最大值（40.00和357.00 s），pH为8.0时湖拟鲤精子的FT和LT达最大值（30.00和100.33 s）。正交试验结果表明，湖拟鲤精子活力综合调控的最优配方为果糖溶液渗透压117.65 kPa、pH 8.0、Na+溶液渗透压188.24 kPa，对应的FT和LT分别是58.33和370.00 s；果糖、pH和Na+对湖拟鲤精子活力的调控力度为果糖>Na+>pH，且表现为果糖和Na+对湖拟鲤精子的FT和LT调控效果有显著影响（P<0.05），而pH的影响不显著（P>0.05）。【结论】适宜浓度的Na+、K+、葡萄糖、果糖及半乳糖对湖拟鲤精子活力均具有较好的促进作用，主要是通过改变渗透压来调控湖拟鲤精子活力；适宜的pH为7.5~8.5。通过正交试验筛选出的湖拟鲤精子最优激活配方为果糖溶液渗透压117.65 kPa、pH 8.0、Na+溶液渗透压188.24 kPa，其调控效果优于单因素最优渗透压，调控力度为果糖>Na+>pH。