【目的】了解湖北省葡萄主产区灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）多样性，为葡萄灰霉病防治提供科学依据。【方法】采用常规微生物分离法对从湖北省8个葡萄主产区采集的葡萄灰霉病样本进行灰葡萄孢菌分离，在PDA培养基上观察分离物菌落培养形态并测定菌丝生长速率；利用特异引物对各分离物的Flipper和Boty转座子片段进行扩增，区分转座子类型；扩增Bc-hch基因并用Hha I酶切检测分离物的多态性以区分组群；依据菌丝生长速率、菌落形态及转座子类型挑选4株典型分离物在4个葡萄品种果实上进行致病力测定。【结果】从病害样本中共分离获得51株分离物，菌落培养形态表明30株分离物为菌核型，20株为孢子型，仅1株为菌丝型，出现频率分别为58.82%、39.22%和1.96%。所有分离物菌丝生长速率均较高，在10.86~13.94 mm/d。分离物只存在2种转座子类型，其中50株为Transposa型，仅1株为Flipper型。Bc-hch基因Hha I酶切多态性鉴定结果表明，所有菌株均为Group II，为狭义的灰葡萄孢菌。分离物致病力测定结果表明，菌丝生长速率最低的WH3在供试葡萄品种上的致病力均最强，其次是Flipper型分离物SX1，菌丝生长速率最高的XN2和菌丝型WH6分离物致病力均较弱，且不同分离物在不同品种上致病力趋势不同。【结论】湖北省葡萄主产区灰葡萄孢菌菌落培养形态较丰富，所有分离物均为狭义灰葡萄孢菌，只存在Transposa和Flipper 2种转座子类型，前者占绝对优势，典型分离物间致病力差异明显。