【目的】明确草地贪夜蛾在贵州省黔西南州的发生和越冬情况，以及越冬幼虫对不同温度环境的适应性，为贵州省草地贪夜蛾的预测预报和综合防控提供参考依据。【方法】选择贵州省黔西南州年均温较高的望谟县、兴仁市、兴义市、安龙县、册亨县和贞丰县为目标调查点，采用灯诱、性诱、田间调查等方法于2019年冬季和2020年春季调查草地贪夜蛾的越冬寄主及越冬虫态，统计虫源数量和百株虫量。将冬季采自望谟县的草地贪夜蛾幼虫以玉米叶分别饲养于室内、室外和人工气候箱，观察草地贪夜蛾冬季幼虫在3种环境条件下的存活率和化蛹率。【结果】性诱捕器和高空测报灯分别于2020年1月13日和2020年3月18日首次在望谟县诱集到成虫，之后在兴义市、兴仁市和安龙县也有发现，虫情测报灯未诱集到草地贪夜蛾。田间调查2019年冬季仅在望谟县桑郎镇发现草地贪夜蛾幼虫，虫龄以3~6龄为主，寄主为散落的再生玉米苗，首次调查百株虫量为34.67头，未发现成虫和卵；2020年春季最早仍在望谟县桑郎镇发现草地贪夜蛾幼虫，虫龄以1~3龄为主，寄主为栽种玉米苗，百株虫量最高为28.00头，且在该地土壤中发现草地贪夜蛾蛹1头，2020年晚春在兴仁市马马崖镇九盘村亦发现1龄幼虫，百株虫量最高达30.00头。草地贪夜蛾越冬幼虫在不同环境条件下饲养第1~2周后的存活率均表现为室内>室外>气候箱，第3周后的化蛹率则是室内饲养的最高，室外最低。【结论】草地贪夜蛾在贵州省黔西南州能终年繁殖，但冬季虫源基数较少，不足以成为本地春季草地贪夜蛾暴发的主要虫源。草地贪夜蛾越冬幼虫更适应偏冷的环境，对突变的温暖环境和较低温度环境均不适应。