【目的】从澳洲坚果（Macadamia integrifolia）叶片中克隆MYB1转录因子基因（MiMYB1）并进行生物信息学分析，为揭示R2R3-MYB家族转录因子成员在澳洲坚果中的抗逆作用机制提供参考依据。【方法】利用PCR从澳洲坚果品种桂热一号叶片中克隆MiMYB1基因，采用ProtParam、TMHMM Server v.2.0和SMART：Main page等在线分析软件对MiMYB1蛋白进行生物信息学分析，运用DNAMAN 7.0进行蛋白氨基酸多序列比对分析，并从NCBI中选取126个拟南芥R2R3-MYB家族成员，以Geneious Pro v4.8.4中的邻接法（Neighbor-joining，NJ）构建系统发育进化树。【结果】从澳洲坚果品种桂热一号叶片中克隆获得的MiMYB1基因序列全长1205 bp，包含1062 bp的开放阅读框（ORF），共编码353个氨基酸，GenBank登录号为MN254975。MiMYB1蛋白具有2个SANT保守结构域，属于R2R3-MYB家族，是无跨膜结构、无信号肽且定位于细胞核的不稳定亲水性蛋白。MiMYB1氨基酸序列（MN254975）与荷花NnMYB39氨基酸序列（XP_010277911.1）的亲缘关系最近，相似性为71.81%；与哥伦比亚锦葵HuMYB102-like（XP_021293847.1）、榴莲DzMYB102-like（XP_022777375.1）、木薯MeMYB102-like（XP_021596793.1）和高山栎QsMYB102-like（XP_023877052.1）的MYB氨基酸序列相似性分别为67.47%、68.63%、64.44%和67.28%。MiMYB1蛋白与126个拟南芥R2R3-MYB家族成员的系统发育进化分析结果显示，MiMYB1与AtMYB41的亲缘关系最近，与AtMYB41、AtMYB74和AtMYB102同属于S11亚族，具有相似的生物学功能，即与植物抗逆性功能相关。【结论】MiMYB1是典型的植物R2R3-MYB转录因子，在澳洲坚果的抗逆反应中发挥作用。