【目的】研究Activin A体外定向诱导大鼠胰腺导管干细胞分化形成胰岛β细胞的作用，为移植体外新生β细胞治疗宠物犬糖尿病打下基础，同时为胰岛细胞体外再生培养的优化提供科学依据。【方法】采用培养液RPMI-1640+10% FBS+10 ng/mL EGF+1%青霉素—链霉素扩增大鼠胰腺导管干细胞至单层，空白对照组加基础培养液，诱导组在基础培养液中分别添加5、10、15和20 ng/mL Activin A，连续培养28 d。诱导培养期间于倒置显微镜下观察细胞形态变化，诱导结束后通过双硫腙（DTZ）染色、细胞免疫荧光染色、ELISA检测及实时荧光定量PCR等方法对分化形成的类胰岛细胞团功能和性状进行验证。【结果】大鼠胰腺导管干细胞经Activin A诱导分化形成球形细胞，并聚集成团（类胰岛），DTZ染色结果均呈阳性。诱导28 d后，20 ng/mL Activin A诱导组的类胰岛细胞团数量及其Insulin基因表达水平均极显著高于其他3个Activin A诱导组（P<0.01，下同），且类胰岛细胞体积最大，类胰岛细胞的Pdx1基因表达水平最高；无论在低葡萄糖（5 mmol/L）还是高葡萄糖（25 mmol/L）的刺激下，20 ng/mL Activin A诱导组类胰岛细胞的Insulin和C-peptide分泌量均极显著高于其他3个Activin A诱导组。【结论】Activin A能体外诱导大鼠胰腺导管干细胞分化形成胰岛β细胞，且以基础培养液中添加20 ng/mL Activin A的诱导效果最佳。