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___________桃树PpGL2转录因子基因克隆及生物信息学分析___________
作者: 赵 丽1  潘彩霞2  庞可勤1  郭君洁3  李 伟3  李鸿雁3*   
单位: (1黄淮学院 园林中心  河南 驻马店 463000;2驻马店市绿化处  河南 驻马店 463000; 3黄淮学院 生物与食品工程学院  河南 驻马店 463000)  
关键词: 桃树  HD-ZIP转录因子  亚细胞定位  酵母单杂交  转录活性  DNA结合位点  
分类号:
出版年,卷(期):页码:2018 ,49 ( 10 ): 页码:1901-1908
摘要:

【目的】克隆桃树同源异型—亮氨酸拉链(HD-ZIP)基因(PpGL2),并对其进行生物信息学分析,为研究HD-ZIP转录因子在植物生长发育过程中的调控机制提供理论依据。【方法】采用RT-PCR从桃树品种春喜中克隆PpGL2基因的开放阅读框(ORF)全长,对其进行序列分析,并构建其亚细胞定位表达载体,通过基因枪法转化洋葱表皮细胞后在激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的分布情况;同时利用酵母单杂交方法检测其转录活性和DNA结合位点及活性。【结果】从桃树幼叶中克隆获得PpGL2基因,其ORF全长为2253 bp,编码750个氨基酸,以碱性氨基酸较多,含典型的START结构域,属于HD-ZIP转录因子家族的Ⅳ亚族,是一种核定位蛋白。PpGL2转录因子与核桃、可可、苹果等HD-ZIP转录因子的氨基酸序列同源性均在84.60%以上,其中与苹果HD-ZIP转录因子(XP_008384034.1)的同源性最高,为92.41%,表明不同物种的HD-ZIP转录因子氨基酸序列高度保守。PpGL2在酵母细胞中具有转录活性和DNA结合活性,可特异性结合回文序列CAATAATTG。【结论】PpGL2转录因子属于HD-ZIP转录因子家族的IV亚族,定位于细胞核,与DNA的结合位点是回文结构CAAT(A/T)ATTG,可能参与调节桃树的生长、发育及抗逆性等重要生理过程。

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