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雷公藤ISSR反应体系的建立与优化
作者: 瞿印权1  徐 雯1  李欣欣1  胡迪科2  何天友2  荣俊冬1  陈礼光1*  郑郁善1  
单位: (1福建农林大学 林学院  福州 350002;2福建农林大学 艺术学院园林学院  福州 350002)  
关键词: 雷公藤  ISSR  反应体系  优化  种质资源鉴定  
分类号:S567.1
出版年,卷(期):页码:2017 ,48 ( 10 ): 页码:1755-1760
摘要:

【目的】建立适合雷公藤的ISSR-PCR反应体系,为雷公藤种质资源的亲缘关系鉴定和遗传多样性分析提供技术支持。【方法】采用单因素试验设计优化影响雷公藤ISSR-PCR扩增效果的Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、引物浓度和DNA模板含量及退火温度,并以32份雷公藤样品对优化的ISSR-PCR反应体系进行验证。【结果】优化的雷公藤种质资源ISSR-PCR反应体系为:20.00 μL反应液中含1.50 U Taq DNA聚合酶、0.30 mmol/L dNTPs、2.00 mmol/L Mg2+、0.40 μmol/L 引物、20 ng DNA模板和2.00 μL 10×Buffer。ISSR-PCR扩增程序中最佳退火温度为54.7 ℃。【结论】建立优化的雷公藤ISSR-PCR反应体系具有较高的稳定性、重现性和适用性,可应用于雷公藤不同地理种源间的遗传多样性鉴定。

【Objective】This research was conducted to establish a ISSR-PCR reaction system for the paternity indentification and genetic diversity analysis of Tripterygium wilfordii Hook. f. 【Method】Single-factor analysis method was applied to optimize and select the main components and annealing temperature of five PCR reaction system having effects on PCR amplification of the 32 T. wilfordii samples,including Mg2+,dNTPs,Taq DNA polymerase,primer concentration and template DNA content. And the 32 samples were used to testify the optimized ISSR-PCR reaction system. 【Result】An ISSR-PCR reaction system applicable for indentifying germplasm resources of T. wilfordii was established: 20.00 μL reaction mixture contained 2.00 mmol/L Mg2+,0.30 mmol/L dNTPs,1.50 U Taq DNA polymerase,0.40 mol/L primer,20.00 ng template DNA and 2.00 μL 10×Buffer. The optimal annealing temperature was 54.7 ℃. 【Conclusion】The T. wilfordii ISSR-PCR reaction system established is of high stability, repeatability and applicability, indicating this reaction system is suitable for the genetic diversity analysis of T. wilfordii from different geographical provenances.

基金项目:

国家科技支撑计划项目(2009BAI73B01); 福建省科技创新平台建设项目(2008Y2001);中央财政林业科技推广项目(闽[2015]TG03号)

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